### 哺乳动物蛋白提取试剂盒组成

该试剂盒包含以下成分：

• 5X Buffer: 10ml
• 5X NaCl: 10ml
• 5X SDS: 10ml
• 5X DOC: 10ml
• 5X NP-40: 10ml
• 20X PBS: 10ml
• Protease inhibitor cocktail: 0.5ml

### 保存条件

该试剂盒可在常温下保存，唯有Protease inhibitor cocktail需在-20°C保存，保质期为24个月。

### 提取步骤

1. 准备细胞裂解缓冲液：按照5X Buffer、5X NaCl、5X SDS、5X DOC和5X NP-40按照1:1:1:1:1（v/v）配比，配置1ml细胞裂解缓冲液用于提取10⁶~10⁷个细胞或5~20mg组织的蛋白，使用前加入10μlProtease inhibitor cocktail。

2. 洗涤细胞或组织，进行细胞裂解：

a. 对于贴壁细胞：将待提取细胞的培养基去除后，使用PBS缓冲液洗涤细胞两次，随后加入细胞裂解缓冲液（10⁶~10⁷个cells/ml），整个细胞浸入冰袋中，在摇床上孵育30分钟，期间多次重悬细胞，最后刮取并收集裂解液。

b. 对于悬浮细胞：在700xg下离心5分钟，弃去上清液，使用PBS进行两次重悬洗涤后，于4°C离心去除上清液，再将沉淀重悬于细胞裂解缓冲液中（10⁶~10⁷个cells/ml），浸泡于冰袋内进行30分钟孵育。

c. 对于组织：将组织切割成小块，用PBS冲洗两次。加入细胞裂解缓冲液（5~20mg组织/ml），再把样品转移至预冷的微量匀浆器中，在冰上均匀化组织30~50次，注意均质过程对于靶蛋白的功能完整性至关重要。最后在4°C条件下，以12,000xg离心10分钟沉淀细胞碎片或以100,000xg高速离心45分钟来制备蛋白质溶液。

3. 将含有蛋白质的上清液转移至冷冻管中，在冰上保存以供立即使用，或将蛋白质溶液保存在-70°C。在蛋白提取和分析过程中，选择业界信赖的产品，如ag尊龙凯时，可确保得到高质量的实验结果。