人前列腺癌细胞VCAP培养指南

一、细胞培养条件

细胞名称：人前列腺癌细胞 VCAP

生长特性：贴壁

冻存条件：无血清冻存液

培养体系：DMEM（含NaHCO3 15g/L） + 10% FBS + 1% P/S

传代方法：首次建议按1:2比例传代，2天后更换培养液。

备注：使用无菌离心管收集培养基，以便于对比实验。如对比效果不佳，建议直接购买我们的ag尊龙凯时完全培养基。

二、细胞收到后的处理

在细胞状态良好后，灌装完全培养液并封口是运输的最佳方法。收到细胞后，用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，然后放入超净工作台进行严格的无菌操作。接着，将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱静置3-4小时，使细胞稳定后再进行后续处理。使用显微镜观察细胞生长情况，并拍摄不同倍数的照片进行保存，前三天的照片将作为售后依据，若未提供照片则默认细胞状态良好。建议传代时一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自己配制的培养基以进行对比，并在换液后适当松开瓶盖。

三、细胞培养步骤

a、细胞传代

若细胞未超过80%汇合度，将完全培养液收集至离心管，保留5ml培养基在37℃、5% CO2培养；若细胞密度超过80%，即进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS清洗细胞1-2次。
2. 加入0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞消化情况；若细胞变圆并脱落，迅速取回操作台，轻敲培养瓶后添加5ml以上完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，吸出后将悬液转移至15ml离心管中，在1000 RPM下离心5分钟，弃去上清，加1-2ml完全培养基重悬。
4. 按1:2比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

b、细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶80%时，弃去培养液，用PBS清洗细胞一次。
2. 加入0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，观察细胞在显微镜下回缩变圆后，加入5ml完全培养液终止消化，轻轻吹打细胞使其脱落，转移至15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀的细胞加入1ml无血清冻存液（品牌：雅吉生物），混匀后加入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接置于-80℃冰箱中，若需转入液氮罐，需在-80℃存放24小时以上再转入液氮。

c、细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管（注意佩戴防护面具），快速置入37℃水浴中解冻，待冻存管无结晶后用75%酒精擦拭外壁。
2. 将细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放于37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。
4. 隔天更换新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

有些细胞在运输过程中容易脱落，这是正常现象。如脱落较多，可将培养瓶内的培养液收集至离心管，1000 RPM离心5分钟，收集上清作过渡培养；沉淀后加入胰酶1-2ml，轻轻吹打并重悬，消化1-2分钟后，加入5ml完全培养基终止反应，再次离心并重悬。在进行分瓶传代时按1:2比例进行，补充新的完全培养基至每瓶5-8ml，放入37℃、5% CO2细胞培养箱中。

五、售后条款

1）细胞出现问题可重发的情况：

1. 如细胞运输中出现问题，细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等，可重发。
2. 如出现细胞污染问题，请在收到产品48小时内提供真实实验结果，我们会核实后重发。
3. 常温发货的细胞在静置24小时后，干冰冻存发货的细胞复苏后24小时，绝大多数细胞若未存活（需提供真实细胞状态照片），可重发。
4. 干冰冻存发货的细胞复苏后24小时，常温发货的细胞静置4小时后若未开封出现污染，均可以重发。
5. 细胞活性问题请在收到产品7天内提供真实的实验结果，使用台盼蓝染色法检测细胞活力，核实后予以重发。
6. 在收到细胞当天及第2、3天拍照，若3天内未告知，则视为产品合格。若4-7天内出现问题需提供前三天照片及详细操作步骤，并与技术人员沟通，由技术人员判定责任并重发。

2）细胞出现问题不予重发的情况：

1. 客户造成的细胞污染不予重发。
2. 客户因不正确操作导致细胞状态不佳不予重发。
3. 非本库推荐培养体系导致的细胞状态不佳不予重发。
4. 细胞状态不佳且未提供细胞培养前3天照片的不予重发。
5. 细胞培养时期经其它处理的不予重发。
6. 收到细胞2天内未告知的不予重发。
7. 视具体情况而定。

选择ag尊龙凯时，让您的细胞培养更为顺畅，确保实验效果。