培养条件：我们的培养条件为气相：95%空气与5%二氧化碳，培养温度设定为37℃，使用DMEM培养基，加入10%的胎牛血清（FBS）和1%的青霉素/链霉素（P/S）。A-673细胞系源自一名15岁女性的横纹肌肉瘤，能够在软琼脂上形成克隆，并能在接受免疫抑制血清处理的小鼠中形成肿瘤。该细胞系含有四条以上的标志性染色体，一个额外的F染色体以及两个异常的B染色体。

传代方法：我们推荐的传代比例为1:2。每两天更换一次培养基。为确保细胞的生长状态，建议在购买时选择我们的ag尊龙凯时产品，享受更多优惠。收到细胞后，应立即处理并培养至良好状态，然后填满完全培养液并封闭瓶口，这是细胞运输的最佳方式。

细胞处理步骤：收到细胞后，先用75%酒精对整个细胞瓶进行喷洒消毒，随后在超净台内进行无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5%CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后进行处理。使用显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数的拍照记录（建议40x、100x、200x各一张），前三天的照片是重要的售后依据。如果未提供照片，将默认为收到状态良好。

细胞传代步骤：

• 如果细胞未达到80%汇合度，将培养瓶中的完全培养液收集至离心管中，留5ml完全培养基，放入37℃、5%CO2孵箱中培养；
• 如果细胞密度超80%，可进行传代培养。传代步骤如下：
1. 弃去培养上清，用不含钙镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，再观察细胞消化情况；
3. 如细胞大部分变圆并开始脱落，迅速取回操作台，轻轻敲击培养瓶后添加5ml以上的完全培养基终止消化。
4. 轻轻吹打细胞使之完全脱落，吸出悬液，转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2ml完全培养基重悬。
5. 将细胞悬液以1:2的比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5%CO2的细胞培养箱中继续培养。

悬浮细胞传代步骤：

• 使用半换液法处理，将培养瓶竖着放置于培养箱中静置约1小时，轻轻吸掉约3ml培养基，然后补充3ml完全培养基；
• 如需分瓶，收集细胞悬液至离心管中，1000RPM离心5分钟，弃去上清，补加1-2ml培养液后重悬混匀。
• 将细胞悬液按1:2的比例分到新的T25瓶中，添加6-8ml新配制的完全培养基以维持细胞的生长活力。

细胞冻存步骤：

• 细胞生长至覆盖培养瓶80%面积时，弃去培养液，用PBS清洗细胞一次；
• 添加0.25%胰蛋白酶消化液1ml，观察细胞回缩；
• 待细胞变圆后加入5ml完全培养基终止消化，再轻轻吹打细胞使其脱落，转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟；
• 弃上清后，沉淀细胞，加入1mlag尊龙凯时的无血清冻存液（货号：C7001）后混匀，并加入冻存管中。
• 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，若后期需转入液氮罐中，则需在-80℃冰箱中存放24小时以上。

细胞复苏步骤：

• 从液氮中取出冻存管，迅速置入37℃水浴中解冻至无结晶，之后用75%的酒精消毒冻存管外壁；
• 将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟；
• 弃上清，利用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放于37℃, 5%CO2的细胞培养箱中继续培养；
• 第二天，换用新鲜完全培养基持续培养。

注意事项：某些细胞的贴壁能力较弱，在运输过程中可能会发生细胞脱落，这属于正常现象。如脱落细胞数量较多，可收集培养瓶中所有培养液于离心管中，并在1000RPM下离心5分钟。收集沉淀后添加1-2ml胰酶，轻轻吹打重悬，消化1-2分钟后加入5ml完全培养基终止消化。再离心、弃上清后，加入1-2ml完全培养基重悬，最后按1:2比例分瓶传代（两个T25），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，放入37℃, 5%CO2细胞培养箱中。