人急性淋巴母细胞白血病细胞MKN45培养说明书

一、细胞培养条件

细胞名称：人急性淋巴母细胞白血病细胞MKN45

生长特性：悬浮生长

冻存条件：无血清冻存液（货号：C7001）

培养体系：1640（含NAHCO3 15g/L） + 10% FBS + 1% P

传代方法：首轮建议1:2的传代比例。每两天更换培养液。

备注：使用无菌离心管收集培养基，留作对比培养。如果对比结果不理想，建议直接选用AG尊龙凯时的完全培养基。

二、细胞处理步骤

收到细胞后，待细胞状态良好后，用完全培养液灌满瓶口并封闭，这是运输细胞的最佳措施。收到细胞后，使用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，随后在超净工作台内进行严格的无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2培养箱中静置3-4小时后再进行后续操作。通过显微镜观察细胞状态，并拍摄不同倍数的照片（最佳为40x、100x、200x各一张）。前三天的照片为售后提供重要依据，若未提供照片，默认接收状态良好。

在传代后，建议一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自备的完全培养基，以便进行对比培养，换液后拧松瓶盖。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

在细胞未超过80%汇合度时，收集培养液至离心管中，保留5ml完全培养基，置于37℃、5% CO2孵箱中培养。若细胞密度超过80%，可进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，使用不含钙和镁的PBS清洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，放于37℃培养箱中消化1-2分钟。显微镜观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速将其带回操作台，轻敲培养瓶后加入5ml以上完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，确保完全脱落后吸出，悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 按1:2的比例将细胞悬液进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2细胞培养箱中继续培养。

b. 细胞冻存

1. 细胞生长至覆盖培养瓶的80%时，弃去T25培养瓶中的培养液，并用PBS清洗细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，倒置并在显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化，轻轻吹打细胞并转移至15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀细胞，加入1ml无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，若需转入液氮罐，则需在-80℃冰箱中存放24小时以上。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护措施），快速置于37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，随后用75%酒精擦拭外壁。
2. 将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀细胞，用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放于37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。
4. 第二天更换为新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

某些细胞可能因贴壁不牢而在运输中易脱落，这是正常现象。若脱离较多，可将培养瓶中所有培养液收集至离心管中，1000rpm离心5分钟，收集上清液作为过渡培养。再次沉淀细胞，加入1-2ml胰酶轻轻吹打，重悬，消化1-2分钟后，加入5ml完全培养基终止反应。再次离心，弃去上清，加1-2ml完全培养基重悬，再按1:2比例进行分瓶传代（两个T25），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，并放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

五、售后条款

1. 重发细胞的情况

1. 细胞运输途中遭遇问题，如丢失、瓶身破损、培养液漏液等，予以重发。
2. 若在收到产品48小时内发现细胞污染问题，需提供真实实验结果，核实后重发。
3. 常温运输后静置24小时或干冰冻存细胞复苏后24小时未存活（需提供真实细胞状态照片），予以重发。
4. 干冰运送的细胞复苏后24小时后或常温发货静置4小时并未开封出现污染，予以重发。
5. 对于细胞活性问题，需在收到产品7天内提供鉴定细胞活力的实验结果，核实后重发。
6. 在收到细胞的当天及第2、3天内拍照留存，若未告知，视为产品合格。在4-7天内出现问题需提供前3天照片及详细操作步骤，若技术人员判定是我方责任，予以重发。技术人员判定为双方责任的，将协商处理或按合同价格的50%收费重发。

2. 不予重发的情况

1. 因客户造成的细胞污染，不予重发。
2. 客户操作不当致使细胞状态不良，不予重发。
3. 使用非本库推荐培养体系导致细胞状态不佳，不予重发。
4. 细胞状态不良且未提供细胞培养前3天的照片，不予重发。
5. 细胞培养时经过其他处理的不予重发。
6. 收到细胞2天内未告知，不予重发。
7. 视具体情况而定。

选择有保障的细胞培养，尽在AG尊龙凯时，打造更健康的生物医疗环境。