ag尊龙凯时提供的大鼠成纤维样滑膜细胞（FLS）培养指南涵盖了细胞的培养条件、处理方法和注意事项，确保用户能够高效、顺利地进行细胞实验。

一、细胞培养条件

细胞名称：大鼠成纤维样滑膜细胞FLS
生长特性：贴壁生长
冻存条件：无血清冻存液（货号：C7001）
培养体系：DMEM + 10% FBS + 1% 双抗
传代方法：首轮建议1:2传代，传代后2天更换培养基。

备注：请用无菌离心管收集培养基，以用于对照实验。如对照实验效果不佳，建议直接采用ag尊龙凯时的完全培养基进行培养。

二、细胞收到后的处理

细胞在培养至良好状态后，应灌满完全培养液并密封瓶口，以确保细胞运输的安全。收到细胞后，请用75%酒精对细胞瓶进行消毒，然后在超净台内进行无菌操作。将细胞瓶放置于37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后再进行后续处理。不妨在显微镜下观察细胞的生长情况，并拍摄不同倍数的照片（最佳选择为40x、100x、200x各一张），前三天的照片对售后服务至关重要。如未提供照片，将默认收到的细胞状态良好。传代时，建议将一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶用自配的完全培养基，以进行有效对比。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

在细胞汇合度未超过80%时，应将瓶内的完全培养液收集至离心管中，留5ml完全培养基，放入37℃、5% CO2的培养箱中继续培养。当细胞汇合度超过80%时，可进行细胞传代，步骤如下：

1. 弃去培养上清液，使用不含钙、镁的PBS对细胞洗涤1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml，放置于37℃培养箱中消化1-2分钟，显微镜下观察细胞状态，若细胞大部分圆化并脱落，迅速放回操作台，轻敲培养瓶后加入5ml以上的完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落后吸出，然后将悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM下离心5分钟，弃去上清液后，补加1-2ml完全培养基重悬细胞。
4. 根据1:2的比例分瓶传代（两个T25瓶），并补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存

细胞长至覆盖培养瓶80%的面积后，弃去培养液，用PBS洗涤细胞一次；然后添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化，轻轻吹打以使细胞脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。

1. 弃去上清液，加入1mlag尊龙凯时的无血清冻存液（货号：C7001），充分混匀后加入冻存管中。
2. 将冻存细胞直接置于-80℃冰箱保存。如需转移至液氮罐中，需在-80℃下存放超过24小时后再进行转移。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管（佩戴防护面具），迅速将其置于37℃的水浴中解冻，直至冻存管内无结晶，之后用75%酒精擦拭冻存管外壁。
2. 将冻存管中的细胞移至含有5ml完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
3. 弃去上清后，用5ml完全培养基重悬细胞，接种至T25培养瓶中，放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中继续培养。
4. 第二天更换为新的完全培养基，以继续培养。

四、注意事项

在运输过程中，有些细胞可能由于贴壁不牢而发生脱落，这种现象是正常的。如果细胞脱落严重，建议按照以下方法处理：

1. 将培养瓶内的培养液全部收集至离心管，1000rpm离心5分钟以收集上清液用于过渡培养。
2. 沉淀后加入1-2ml胰酶，轻轻吹打，重悬并消化1-2分钟，随后加入5ml完全培养基终止反应。
3. 再离心，弃去上清，加1-2ml完全培养基重悬，然后根据1:2的比例分瓶传代（两个T25），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

五、售后条款

ag尊龙凯时为您提供细胞实验的全面支持，以下是我们针对细胞出现问题时的处理原则：

• 如细胞在运输过程中出现问题（如丢失、破损、培养液漏液等），我们将负责重发。
• 对于细胞污染问题，请在收到产品48小时内提供真实实验结果，我们将核实后进行重发。
• 若收到的细胞在特定条件下（常温或干冰运输）复苏后存活情况不理想，需提供真实细胞状态照片以便核查。
• 如客户未能在规定时间内反馈问题，默认细胞状态良好。

感谢您选择ag尊龙凯时，我们将竭诚为您服务，确保您的细胞实验顺利进行。